通过基因技术来进行疾病的诊断是最为准确的。现在对于像尖锐湿疣这种性病,我们也有了较为成熟的基因检查方法,通过基因检查方法我们就可以准确确诊尖锐湿疣。虽然基因检查法并不是最简单的方法,但却绝对是最准确的方法。

(一)标本的采集及处理

1.标本的采集和预处理:用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时,将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS离心(3000g,10min)洗涤2次,沉积细胞重悬于1mlPBS中,取0.5ml细胞悬液抽提。

2.标本核酸的提取:按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/L Tris-HCl,pH 7.4,10mmol/LEDTA,150mmol/LNaCl,0.4%SDS,1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(1:1),氯仿/异戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10体积3mol/LNaAc(pH 5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl,pH8.0,1.0mmol/L EDTA)溶解DNA,37℃温育。

(二)PCR扩增

1.引物设计和合成:HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L),每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1,该引物与HPV6、11、16、18及33型有互补序列,也可扩增其它型。

2.PCR反应试剂:Taq DNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/LdNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10×PCR缓冲液(500mmol KCl、40mmol/LMgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5),100μmol/L MY11和MY09贮备液,灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。

上面所描述的就是基因技术检查尖锐湿疣的过程,可能对于一般人来说了解这个过程并没有什么太大的意义。但其实对于病情的检查和治疗,我们多知道一些总比少知道一些要强,特别是像尖锐湿疣这种性病,多了解就为治疗多增加了一份保障。